Welcome!

By registering with us, you'll be able to discuss, share and private message with other members of our community.

SignUp Now!

معرفی دستگاه ترمال سایکلر و راهنمای خرید دستگاه ترمال سایکلر

اطلاعات موضوع

Kategori Adı اخبار پزشکی
Konu Başlığı معرفی دستگاه ترمال سایکلر و راهنمای خرید دستگاه ترمال سایکلر
نویسنده موضوع tajhizyar
تاریخ شروع
پاسخ‌ها
بازدیدها
اولین پسند ارسالی
Son Mesaj Yazan tajhizyar

tajhizyar

کاربر انجمن
تاریخ ثبت‌نام
May 14, 2016
ارسالی‌ها
1
پسندها
0
امتیازها
0

اعتبار :

دستگاه
ترمال سایکلر
چیست :
این روش فوق العاده ساده بوده و با استفاده از تغییرات حرارت می*توان چندین فرآیند را به دنبال همدیگر انجام داد. با این تکنیک می*توان به عنوان یک روش قدرتمند تشخیص بالینی (Diagnostic) برای وجود موتاسیون*ها در ژنوم انسانی ، یا برای وارد کردن جهش*های ویژه به داخل ژن همسانه شده ، استفاده کرد.


دستگاه PCR بطور دستی و با قرار دادن پر زحمت و انتقال لوله*های آزمایش بین حمام*های آب دارای دمای لازم ، بوجود آمد. امروزه دستگاههایی بطور تجارتی تهیه می*شوند که در آنها جایگاههای لوله*ای با بلوک فلزی حرارت پذیر تعبیه شده است و قابل برنامه ریزی برای تغییر سریع بین دماهای لازم است. π چرخه PCR ، DNAی مورد نظر را 2π بار تکثیر می*کند.
تاریخچه
در گذشته معمولا از روش های شیمیایی برای تولید قطعات نوکلئوتیدی استفاده می*کردند، اما این روش ها پر زحمت بوده و نیاز به مدت زمان طولانی داشتند از سال 1980 به بعد عمدتا از روش PCR در آزمایشگاههای زیست شناسی مولکولی استفاده می*شود.
مراحل PCR
· مرحله دناتوراسیون DNA: در مرحله اول برای مدت کوتاهی (30S) قطعات DNA را در درجه حرارت 94 درجه سانتیگراد حرارت می*دهند تا دو زنجیره DNA از هم باز نشود.
· مرحله پرایمر و مرحله اتصال دو قطعه نوکلئوتیدی: این قطعات معمولا از 25 - 18 باز آلی تشکیل می*شوند و می*توانند به قطعات مکمل خود که بر روی ژن مورد نظر قرار می*گیرند، اتصال یابند. قطعه*ای که در آن PCR به تعداد زیاد ساخته می*شود. ما بین دو پرایمر ساخته می*شود. مرحله اتصال پرایمرها کوتاه بوده و حدودا 30S در دمای 65 - 30 درجه سانتیگراد صورت می*گیرد.
· مرحله پلیمریزاسیون یا مرحله سنتز: در این مرحله با دخالت آنزیم DNA پلیمر از بر روی رشته DNA الگو. سنتز DNA با استفاده از نوکلئوتید تری فسفات*هایی که در محلول وجود دارند، صورت می*گیرد و برای سنتز DNA همیشه یک رشته DNA به صورت الگو و یک قطعه پلی نوکلئوتیدی به عنوان پرایمر مورد نیاز است.


Real-Time PCR
‏ به علت ورود نسل جدیدی از ترموسایکلرها با سیستم فلورومتری در بازار
فروش ترمال سایکلرکه اجازه پایش پیوسته خاصیت فلوئورسانس محصول ‏PCR‏ در زمان جمع شدن را می*دهد، این روش ابداع شد. در این روش از کاوشگرها یا پروب*های هیبریداسیون نشان*دار شده با رنگ*های فلورسانس در انتهای 5 یا 3 استفاده می*شود. که امکان پایش پیوسته محصول ‏PCR‏ را بدون جداسازی آنها در روش*های الکتروفورز در ژل آگاروز یا ژل پلی آکریل آمید می*دهد. این سیستم در سال 1992 کشف شد. این روش به دلیل کاهش زمان سیلک*های ‏PCR، حذف مرحله ‏Post-PCR‏ و کاربرد نشانگرهای فلوروژنیک و روش*های حساس آشکارسازی تابش آنها باعث افزایش سرعت این سیستم نسبت به سیستم ‏PCR‏ معمولی شده است. سازندگان و کاربران این روش سعی می*کنند محصول ‏PCR‏ کوچک*تر طراحی کنند تا سرعت افزایش یابد اما تجربه نشان داده که کاهش اندازه محصول لزوماً بازده ‏PCR‏ را بهینه نمی*کند. البته این روش دارای معایبی نیز است از جمله می*توان به عدم ناتوانی در مشخص کردن اندازه محصول بدون باز کردن سیستم و ناسازگار بودن برخی پلت فرم*ها با شیمی برخی رنگ*های فلورژنیک اشاره کرد. برای شناسایی بسیاری از ویروس*های عامل بیماری*های انسان از این روش استفاده شده است. ‏


اصول کار با
دستگاه Real time PCR
وجه افتراق Real Time PCR با PCR نوع معمولی به کار گرفتن یک نشانگر فلورسنت در واکنش جهت ردیابی محصول واکنش می باشد. این گزارش*گرها به گونه*ای طراحی می*شوند که در صورت تکثیر DNA نور تولید کنند. لذا افزایش شدت نور ثبت شده در دستگاه با میزان محصول بدست آمده نسبت مستقیم دارد. به اولین چرخه*ای که شدت فلورسنت بیشتر از خط پایه (Threshold)باشد چرخۀ آستانه یا CT گویند. عدد CT با مقدار الگوی اولیه رابطۀ معنی داری دارد و از روی آن می*توان مقدار mRNA اولیه را تخمین زد. به عبارت دیگر در فاز اولیه مرحله تصاعدی مقدار فلورسنت افزایش می یابد تا به آستانه*ای می رسد که به مقدارمشخصی از سطح background بالاتر است، این چرخه ( سیکلی از PCR که قطعه تکثیر از حد آستانه عبور می کند) به عنوان CT شناخته می شود.

[URL="http://tajhizyar.com/lab-equipment/pcr-machine/"]خرید ترمال سایکلر
[/URL]برای خرید دستگاه pcr یا
ترمال سایکلرو اطلاع از
قیمت ترمال سایکلرمی توانید به لینک زیر مراجعه نمایید :


http://tajhizyar.com/lab-equipment/pcr-machine/


به طور کلی Real time PCR چند مرحله دارد که عبارت است از:
1- Baseline rgion : در این مرحله هیپ گونه نوری قابل رویت نیست.
2- Exponential phase : محصول دو رشته ای در هر چرخه دو برابر می شود و رشد تصاعدی مربوط به واکنش آغاز می شود.
3- The liner phase: ترکیبات واکنش و کارایی آنها روبه اتمام است.
4- The plateau phase: ترکیبات واکنش از بین می روند و افزایشی در میزان فلورسنت مشاهده نمی شود.


روشReal time PCR می تواند به دو صورت One step ( همزمان در یک واکنش ساخت cDNA از RNA و تکثیر آن صورت می گیرد) و Two step ( ابتدا ساخت cDNA و در واکنش دیگر تکثیر آن ) انجام میشود.



 
بالا پایین